两种试验方法对5种消毒剂杀菌效果的比较
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中国消毒学杂志2005年第22卷第2期 ・143・ 文章编号:1001—7658(1005)04—0143—02 【论著】
两种试验方法对5
种消毒剂杀菌效果的比较
谈智 徐燕 王玲 陈越英 周品众
(江苏省疾病预防控制中心,
南京210009)
提要为了解不同版次《消毒技术规范》规定的试验方法与判定依据对评价消毒剂杀
菌效果的差异,按照第3版规
范规定的载体浸泡定量杀菌试验和2002年版规定的悬液定量杀菌试验
方法对含氯消毒剂等5种消毒剂杀菌效果
进行了平行比较。结果,用第3版规范载体法测定达到消毒合
格所需剂量,含氯消毒剂对大肠杆菌和白色念珠菌
为有效氯200 me/L分别作用2.5 min
和5 min;过氧化氢用31.69 g/L作用2.5 min;有效碘500 me/L作用5 min和
1000 me/L作用7 min;醋酸氯己定3060 me/L作用2.5 min。按照20
02年版规范,悬液法测定达到消毒合格所需剂
量,含氯消毒剂对大肠杆菌和白色念珠菌分别为有效氯
6OO me/l ̄作用10 min和700 mg/l ̄作用5 min;过氧化氢为
31.69
g/L作用15 min;有效碘260 me/L作用5 min和2.5 min;醋酸氯己定只需要30
6 me/l ̄作用5 min。结论,两
种方法所得的消毒合格剂量有较大差异,2002年版规范
悬液法试验对含氯消毒剂和过氧化氢消毒剂所需剂量增
加,对碘伏和醋酸氯己定所需剂量降低。 关键词载体试验;悬液试验;杀菌效果;大肠杆菌;白色念珠菌
中图分类号:R187.2 文献
标识码:A
Co Ⅱ,ARIsoN oF GEIt ⅡCⅡ)AL EFFICACY oF F
IVE DIs玎 FECT A NTS TESTED BY rWo
M匝 IoDS
TAN Zhi,XU Yah,WANG Ling,CHEN Yue一 , ,ZHOU Pin—zho
ng
(Jiangsu Provincial Center for Disease Prev
ention and Control,Nanjing 210009,China)
Abstr
act In order to know the diference of evaluating t
he germicidal ettleaey of disinfectants accordinl ̄
to the test meth—
ods andjudging criteria spec
iifed in diferent editions of“Disinfection Technic
al Guidelines”,the germicidal efficacy offive
disinfectants including chlorine—containing disinf
ectants WaS comr, ̄parallelly using the carrier imm
ersion quantitative
germicidal test speciifed
in the 3rd edition of the Guidelines and suspensio
n quantitative germicidal test method speciifed in
the 2002 edition.Results:For killing Eschetic
h/a col and C,andida albicans.the dosage required
to attain eligible disin.
fection measured wit
h the calTiel"method in 3rd edition of the Guideli
nes WaS available chlorine 200 mc/L in chlorine—CO
n.
mining disinfectant tll 2.5 min and 5 min c
ontact time respectively.hydrogen peroxide 31.69 g
/L with a 2.5 min contact
time.available iodin
e 500 mg/L witll a 5 min contact time and 1000 mg/
L with a 7 min contact time respectively and chlo-
rhexidilie acetate 3060 mg/L with a 2.5 min c
ontact time.According to the 2002 edition ofthe Gu
idelines.the dosage re.
quired to attain eligi
ble disinfection measured with the suspension meth
od WaS available chlorine 60o me./L with a 10 min
contact time and 700 me./L with a 5 min contac
t time for killing E.coli and C.albicans respectiv
ely when chlorine—eontai—
ning disinfectant Wi
lls used,hydrogen peroxide 31.69 g/L tll a 15 min
contact time,available iodine 260 mg/L tll a 5
min and 2.5 min contact time respectively and chl
orhexidine acetate 306 me,/L with a 5 min contact
time.Conclusions:
The eligible disinfection do
sage measured by the two methods showed considerab
le difel ̄tnce. en the suspension test
method s
peciifed in 2002 edition WlttS used,the dosages of
chlorine—containing disinfectant‘and hydrogen per
oxide disin-
feetant required WaS increased.wh
ile the dosages of iodophor and chlorhexidine acet
ate required Wilts decreased.
Key words carrie
r test;suspension test;germicida1.jq',cacy;Escheri
chia coli;Candida albicans
我国对于化学消毒剂理化性能及杀菌效果评
技术规范》首次对消毒实验技术进行了系统规范,
价,主要依据卫生部《消毒技术规范》中
规定的方 2002年版《消毒技术规范》对杀菌试验方法和判定
法,依据其结果,判定是否符合要求
。第3版《消毒
依据作了较大改动。这些方法和结果判定的变动,
将对同一种消毒剂的试验
结果产生影响。为了掌握
[作者简介]谈智(1970一),女,湖南湘潭人,大学,副主任技师,
第三、四版规范规定的方法对试验结果影响程度,以
主要从事消毒学专业工作。
含
氯消毒剂(A)、碘伏(B)、过氧化氢(C)、醋酸氯己
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br>・
144・
定(D)和邻苯基苯酚(E)等5种消毒剂为对象,用
两版规范
规定的载体定量和悬液定量杀菌试验方法
进行了观察。含氯消毒剂为一种淡黄色液体,有效
氯含量9OOO mg/L;碘伏消毒液为红棕色粘稠液体,
含有效碘5000 mg/L;过氧化氢
消毒液,无色透明液
体,含量为39.61 g/L;越星牌皮肤消毒液,无色透
明,醋酸
氯己定含量3060 mg/L;奥扑牌消毒清洁液
主要成分为邻苯基苯酚,淡黄色粘稠液,含量84
.06
L。现将各种消毒剂试验结果报告如下。
1方法
1.1茵悬液制备 选用大肠杆菌(8099)和白色念珠菌(ATCC
10231)为试验菌株,由军事医学科学院
消毒检测中
心提供。取各菌24 h新鲜培养物,用含10 g/L蛋白
胨磷酸盐缓冲液配
制成试验菌悬液。取菌悬液20
滴染于1 cm X 1 cm灭菌脱脂白平纹布片上,干
燥后备用。
1.2中和剂鉴定试验
用大肠杆菌和白色念珠菌进行中和剂鉴定试
验
。
1.2.1载体定量法¨ 设计8组试验,按载体定量
杀菌试验程序进行中和剂鉴定试验
。结果判定,以
第6、7、8组不长菌,1组不长菌或菌数明显少于第2
组,第2组长菌超
过50 ofu/片,第3、4、5组组问误
差率不超过15%时,表明中和剂及其浓度适宜。试 <
br>验重复3次。
1.2.2悬液定量法 设计6组试验(表1),按悬
液定量杀菌试验
程序进行。结果判定,以第1组无
菌或仅少量菌生长,第2组菌比第1组多,但比第
3、4
、5组菌明显少,第3、4、5组菌数接近并满足试
验菌数要求,且组问误差率不超过15%,表明中
和
剂及浓度适宜。试验重复3次。
1.3定量杀茵试验
1.3.1载体浸泡定量
杀菌试验【l 5种消毒剂分别
取各自试验浓度,按每片5 Inl消毒液量加入到小平
皿
内(阳性对照为灭菌蒸馏水)于20cI二恒温;加入菌
片作用至预定时问,取出菌片投人5.0 m
l适宜的中
和剂中,振荡洗脱,接种平板,37℃培养48 h计数菌
数,计算杀灭率。结
果以杀灭率>--99.9%,判消毒合
格。试验重复3次。
1.3.2悬液定量杀菌试验
用无菌硬水配制试验
浓度1.25倍的消毒液于20cI=恒温,取0.5 ml菌悬
液
加入等量3%牛血清白蛋白混合,再加入4.0 ml
消毒液,立即混合均匀;作用至预定时间,取出
菌药
混合液0.5 ml,加入4.5 ml中和剂中,中和作用10
Chinese J
ournal of Disinfection 2005;22(2)
min,进行活菌计数。
结果以对大肠杆菌杀灭对数值≥5.00为消毒
合格,对白色念珠菌杀灭对数值I>4.00
为消毒合
格。
2结果
2.1中和剂鉴定试验结果
2.1.1载体法中
和剂鉴定结果结果表明,以含5
g/L硫代硫酸钠、1 g/L卵磷脂、5 g/L吐温80的 PBS和5 g/L硫代硫酸钠、5 g/L吐温80的PBS可
分别作为含氯消毒液和碘伏消毒
液中和剂;以含5
g/L硫代硫酸钠、3 g/L卵磷脂、5 g/L吐温80的
PBS作
为过氧化氢消毒液、醋酸氯己定消毒液和邻
苯基苯酚消毒清洁液的中和剂(表略)。结果均为
本研究中各消毒剂最高试验浓度。
2.1.2悬液法中和剂鉴定结果结果表明,以含5
g
/L硫代硫酸钠、1 g/L卵磷脂、5 g/L吐温80的
PBS的TSB和500 mg/L硫代
硫酸钠、500 mg/L吐
温80的TSB可分别作含氯消毒液和碘伏消毒液的
中和剂;
以含24 g/L硫代硫酸钠、5 g/L卵磷脂、20
g/L吐温80的TSB可作为过氧化氢的中
和剂;以
500 mg/L硫代硫酸钠、500 mg/L卵磷脂、2000 mg/L
吐
温80的TSB作为醋酸氯己定消毒液的中和剂;
用含5 g/L硫代硫酸钠、5 g/L卵磷脂、2
0 g/L吐温
80的TSB作为邻苯基苯酚消毒清洁液的中和剂(表
1)。结果均为本研
究中各消毒剂最高试验浓度。
表1悬液法中和剂鉴定试验结果
Taibe 1 Resul
ts of neutr ̄]zer qualiifcation test by suspen-
sionmethod
注:试验温度为2O℃。用上述中和剂对相应的消毒剂进行白色念珠
菌中和剂鉴定试验,结果与大肠杆菌一致。表中ABCDE依次代
表5种消毒剂。
Nor
e:耶1e temperatu ̄was 20℃.The results of neuti ̄izer
qualiifcation
test for the neuⅡalizers of corr
esponding disinfectants using Candida
albicam
as the tset microorganism were identical with thos
e using E.
coil.ABCDEinthe e representthe 5 di
sifnectantsinturn.
2.2定量杀茵试验结果
2.2.1载体定量杀菌
试验结果结果表明,以有效
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中国消毒学杂志2005
年第22卷第2期 ・145・
氯200 mg/L的含氯消毒液分别作用2.5 min和5 min,对布片上大肠杆菌和白色念珠菌杀灭率均达到
杆菌杀灭率为100%;含醋酸氯己定30
60 mg/L皮
肤消毒液作用2.5 min,对大肠杆菌杀灭率为
99.9%以上;以
有效碘500 mg/L的碘伏消毒液作用
5 min,对大肠杆菌杀灭率为99.95%,有效碘1
000
100%,对白色念珠菌杀灭率为99.94%;含邻苯基
苯酚841 mg/L消
毒清洁液作用5 rain,对大肠杆菌
mg/L作用7 min,对白色念珠菌杀灭率为100%;
含
的杀灭率为99.96%,含1681 mg/L作用5 min,对
过氧化氢31.6
9 g/L的消毒液作用2.5 min,对大肠 白色念珠菌的杀灭率为99.99%(表2,表3)。 表2对大肠杆菌载体浸泡定量杀菌试验结果
Table 2 Results of E col
i carrier immersion quantitative germicidal test <
br>注:试验温度为20 ̄C。5种消毒剂试验对照组菌数依次为l 520 ooo cfu/片、2 15
0 ooo cfu/片、773 ooo cfu/片、l 720 ooo cfu/片、l 690 oo
o cfu/
片。
Note:The temperature was 02 ̄C.Th
e bacterial counts of the ̄ntrol groups of the 5 di
sinfectants were l 520 ooo efu/earrier
,
2 1
50 ooo efu/carner,
773 ooo efu/earrier.1 720 o
oo efu/earrier and l 690 000 efu/earrier respectiv
ely.
表3对白色念珠菌载体浸泡定量杀菌试验结果
Table 3 Results
of C a/b/cans C ̄-l-iel-immersion quantitative germ
icidal test
注:试验温度为20 ̄C。表内4种消毒剂试验阳性对照组菌数依次为1 3
20 ooo eh/3 ̄、866 000 c矗 片、2 750 ooo eh/3 ̄、1 680 00
0 cfu/片。
Note:The temperature w舾20 ̄C.The bacte
rial counts 0fpositive ̄ntrol groups ofthe 4 disinf
ectants weie' 1 320 000 efu/earrier
,
866 00
0 cfu/carrier,
2 750 ooo efu/earrier and 1 680
000 cfu/carrier ̄tively.
2.2.2悬液定量杀菌试验结果 结果表明,
以含有
白色念珠菌杀灭率>99.99%;以含有效碘260 mr,/
效氯6OO mg
/L含氯消毒液作用10 min,对大肠杆菌
L碘伏消毒液作用2.5 min,对白色念珠菌杀灭
率>
杀灭率>99.999%,有效氯700 mg/L作用5 min对
99.99%,
作用5min对大肠杆菌杀灭率>99.999%;
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・
146・ Chinese Journal of Disinfection 2005;22(
2)
含过氧化氢31.69 g/L消毒液作用15 min,对大肠
杆菌杀灭率>99.
999%;含醋酸氯己定306 mg/L皮
肤消毒液作用5 min,对大肠杆菌的杀灭率> 99.999%。对白色念珠菌杀灭率>99.99%;含邻苯
基苯酚841 mg/L消毒清洁
液作用5 min,对白色念
珠菌杀灭率>99.99%,作用15 min对大肠杆菌杀
灭率>99.999%(表4)。
表4悬液定量杀菌试验结果
Table 4 Resul
ts of suspension quantitative germicidal test
注:试验温度为20℃。阳性对照组菌数对数值,大肠杆菌为7.28~7.8O ,白色念珠菌为6.12—6
.47 log。
Note:The temperature WaS20℃.The lo ̄th
m ofbacterial count ofpositive control gzoup WaS 7
.28~7.80 log forE coli and 6.12~6.47 lg foor C
a/b/cans.
3讨论
法不同所致,2002年版规范中的悬液法引入了3% 牛血清白蛋白作为有机干扰物,消耗了大量消毒剂,
从而削弱了消毒剂的杀菌效果,此对于受有机
物影
响大的消毒剂(含氯消毒剂、过氧化氢)更为明显。
另外,两版规范对消毒剂配制,菌
悬液配制均有所不
同,都会对杀菌效果产生影响。②消毒剂作用机理
不同所致,由于碘伏中
的游离碘能迅速穿透细胞壁,
有较强的渗透力并与0一H,N—H,S—H基团作用
影响微
生物的存活,而醋酸氯己定由于能迅速吸附
于细胞表面,破坏细胞膜,使胞浆成分渗漏,所以,这 <
br>试验结果表明,按照第3版和第4版规范规定
的方法和判定依据,对同一种消毒剂得出不同的合
格剂量。按第3版规范载体法达到消毒合格所需剂
量,含氯消毒剂对大肠杆菌和白色念珠菌
为有效氯
200 mg/L分别作用2.5 min和5 min;过氧化氢用
31.69
g/L作用2.5 min。按照2002年版规范悬液
法达到消毒合格所需剂量,含氯消毒剂对大
肠杆菌
和白色念珠菌分别为有效氯6OO mg/L作用10 min
和700 mg/L
作用5 min。后者方法消毒所需剂量明
显增加。
两类消毒剂对于分散于悬液中的微生物
比载体上的
微生物更容易杀灭。
虽然2002年版悬液法试验条件对于评价化学
对于碘伏消毒剂和氯己定则得出相反结论。按
第3版规范规定,对大肠杆菌和白色念珠菌达到消 毒合格,分别为有效碘500 mg/L作用5 min和1000
mg/L作用7 min;醋
酸氯己定对大肠杆菌和白色念
珠菌达到消毒合格分别为3060 mg/L作用2.5 min。 <
br>按照2002年版规范规定,对大肠杆菌和白色念珠菌
达到消毒合格分别为有效碘260 mg
/L作用5 min
和2.5 min;醋酸氯己定对大肠杆菌和白色念珠菌达
到消毒合格
则只需要306 mg/L作用5 min。后者方
法消毒所需剂量则有所降低。
上述结果
表明,对于同一种消毒剂,由于分别采
取不同试验方法和评价依据,得出不同消毒剂量。
造
成这种差异可能有以下主要原因:①试验方
消毒剂更为严格,但对某些消毒剂如含氯消毒剂有
效浓度增加明显。如何解决两版规范交叉阶段批准
的同类消毒剂造成的差异给企业和使用者带来的困
惑,还需要卫生行政管理部门和广大专业人员进行
更多的研究。
参考文献 (1]卫生部卫生法制与监督司.消毒技术规范第1分册[M].北
京:中华人民共和国卫生部,
1999:16~32.
[2] 卫生部卫生法制与监督司.消毒技术规范第1分册[M].北 京:中华人民共和国卫生部,2002:15-42.
(2o04—03—11收稿)