过氧化物酶活性的测定

玛丽莲梦兔
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2020年08月02日 04:28
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一、实验目的: 过氧化物酶是植物体内重要的呼吸酶类,其活性高低与酶类物质代谢,植物抗性密切相关。通过实验掌握提取POD和测定其活性方法和原理。 二、实验原理: 过氧化物酶催化H2O2氧化酶类,生成醌类化合物,此化合物进一步缩合或与其它分子缩合,产生颜色较深产物。本实验以愈创木酚为底物,过氧化物酶催化H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物,次产物在470nm波长处有最大吸收峰,故可通过测定470nm波长下的吸收光度变化得知过氧化物酶的活性。 三、材料与试剂 材料:马铃薯 试剂:20m mol/L KH2PO4,反应混合液 四、方法步骤: 1、 酶液制备:称取材料1.079g,加入20m mol/L KH2PO4 5ml,于研钵中研磨成匀浆,在 3000r/min,下离心10min,上清液转入25ml,容量瓶,残渣再用5ml, KH2PO4,提取一次,定容,混匀,贮于冷凉处备用。 2、 比色测定:光径1cm比色杯两只,1只先加1ml KH2PO4,再加3ml混合液作参比液; 另一只加1ml,酶液,3ml混合液,立即计时并置于分光光度计中,在470nm下测定光密度,每隔1min读数一次,连续测8min,每次测定前重新对照校准。

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