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第二十四章 免疫诊断
一、单选题
1．下列免疫学测定方法敏感性最高的是：
A．沉淀反应
B．凝集反应
C．ELISA
D．放射免疫测定
E．补体结合试验
2．反向间接凝集试验是检测标本中哪种成分？
A．抗体
B．补体
C．抗原
D．抗原抗体复合物
E．以上均不是
3．用免疫荧光技术间接法检测组织中的抗原，应将荧光素标记：
A．抗原
B．相应抗体
C．抗免疫球蛋白抗体
D．抗原抗体复合物
E．抗C3抗体
4．用ELISA双抗体夹心法检测抗原A时，固相载体的包被物是：
A．酶标抗A抗体
B．未标记的抗A抗体
C．酶标抗原A
D．未标记的抗球蛋白抗体
E．酶标抗球蛋白抗体
5．用免疫荧光技术直接法检测病原微生物时，荧光素应标记在：
A．微生物上
B．抗人Ig抗体上
C．抗原抗体复合物上
D．抗微生物抗体上
E．抗C3抗体上
6．目前使用最广泛的荧光素为：
A．FITC
B．RB200
C．TRIT-C
D．镧系螯合物
E． 伊文思蓝
7 有关金标准的概念正确的是：
A．只用于评估一种试验的特异性
B．只用于评估一种试验的敏感性
C．假设检测结果100%可靠
D．是除特异性和敏感性外的另一种评估方式
E．只确定阴性结果的可靠性

8. T细胞能形成E花环是因为其细胞膜上具有：
2
B. CD3
C. CD4
8
E. CD28
9.E花环试验可用于：
A.T细胞功能测定
B. T细胞的分离
C. B细胞功能测定
D. CD4
+
T细胞计数
E. CD8
+
T细胞计数
10.用小鼠抗人CD3单克隆抗体，检测T细胞，其结果代表的是：
A. T细胞总数
B. T
H
细胞数
C.T
S
细胞数
4
+
细胞数
E. CD8
+
细胞数
11.下列哪项指标可以评价AIDS患者的细胞免疫功能？
A． CD2
+
CD3
+
细胞比值
3
+
CD4
+
细胞比值

3
+
CD8
+
细胞比值
4
+
CD8
+
细胞比值
2
+
CD4
+
细胞比值
12. 外周血E花环阳性细胞总数代表的是：
A. CD4
+
T细胞数
B. CD8
+
T细胞数
C.B细胞数
细胞数
E.T细胞总数
13.人T淋巴细胞转化试验最常用的刺激因子是：




E.特异性抗原
14．溶血空斑试验检测的是哪类细胞的功能？
A.T细胞
B.巨噬细胞
细胞
D.B细胞
细胞
15.常用的检测细胞毒效应的方法是：
A．
31
P掺入法

125
B． I释放法
51
C． Cr释放法
D． 形态学检测法
E． 移动抑制试验
16.评价病人T细胞功能的试验是：
A.血清免疫球蛋白的测定
B.溶血空斑试验
C.淋巴细胞转化试验
D.膜表面免疫球蛋白测定
E.E花环试验
17.检测中性粒细胞吞噬功能的方法是：
A.四唑氮蓝还原试验
B. 过氧化物酶测定法
C.溶血空斑试验
D. 琼脂糖凝胶法
E.补体介导的细胞毒试验
18．单向琼脂扩散试验通常不用来检测：
A．IgM
B．IgA
C．IgG
D．C3
E．IgE
19．下列哪项试验不是凝集反应？
A．ABO血型鉴定
B．免疫妊娠实验
C．快速血浆反应素环状卡片试验
D．肥达反应
E．病毒血凝试验
20．沉淀反应与凝集反应相比较，下列哪项是错误的？
A．都是抗原抗体的反应
B．都需要电解质参与
C．沉淀反应的抗原是可溶性抗原或颗粒性抗原
D．两种反应均可用来定性或定量检测抗原或抗体
E．凝集反应的抗原是颗粒性抗原
21.关于溶血空斑试验，下列哪项是错误的？
A.一个空斑代表一个抗体生成细胞
B. 需要绵羊红细胞和补体参与
C.空斑大小代表抗体产生的多少
D.可检测IgG和IgM
E.只可检测IgG

二、多选题
1．免疫印迹法包括下列哪三个方面？
A．用免疫荧光法鉴定抗原

B．将蛋白质从凝胶转移到固相膜
C．用Northern Blot分离鉴定蛋白质样品
D．用SDS- PAGE分离蛋白质样品
E．用相应染色法检测固相膜上的蛋白质印迹
2．关于间接免疫荧光技术，哪些是正确的？
A．可以检测抗原
B．可以检测抗体
C．敏感性较直接法明显提高
D．用一种标记的抗球蛋白抗体，能检查多种以球蛋白作为作为抗体的复合物
E．易出现非特异性荧光
3．ELISA检测抗原的方法有：
A．双抗体夹心法
B．双位点一步法
C．BAS-ELISA法
D．间接法
E．双抗原夹心法
4．测定人血清IgG含量的方法有：
A．直接凝集反应
B．补体结合反应
C．免疫比浊法
D．单向琼脂扩散试验
E．免疫电泳
5．抗原抗体反应的特点是：
A．具有特异性
B．反应与温度、pH等有关
C．为不可逆结合
D．比例适当时出现可见反应
E．结合力大小与抗原抗体的亲和力相关
6．用已知抗体检测抗原的方法有：
A．免疫荧光技术（直接法）
B．免疫荧光技术（间接法）
C．ELISA（夹心法）
D．BAS-ELISA
E．反向间接血凝反应
7．生物素-亲合素系统（BAS）的特点包括：
A．一个亲合素分子可以结合四个生物素分子起放大作用
B．一个生物素分子可以结合多个亲合素分子起放大作用
C．亲合素和生物素有极强的亲和力，起多级放大作用的特异性
D.亲合素易与酶、铁蛋白、荧光素、核素结合
E生物素易与抗体、酶、多聚核苷酸结合
8.细胞免疫功能的测定包括以下哪些？
A. T细胞数量测定
B. T细胞表面标志测定
C. T细胞增殖试验

D. 细胞毒试验

9.淋巴细胞亚群测定常用的方法有：
A.免疫荧光法
B.流式细胞仪测定
C.酶免疫组化法
D.放射免疫法
E.间接凝集法
10.检测细胞免疫功能的体内试验的抗原有以下哪几种？
A. 链激酶-链道酶
B. 结核菌素
C. 脂多糖
D. 念珠菌素
E. 麻风菌素
11.T淋巴细胞转化试验常用的检测方法有哪些？
A.流式细胞仪法
B.形态学方法
C.
51
Cr释放法
检测法
E.
3
H-TdR掺入法
12.细胞因子的生物学活性检测方法有哪些？
A.单克隆抗体检测法
B.依赖细胞株增殖法
C.靶细胞杀伤法
D.细胞因子诱导的产物分析法
E.细胞病变抑制法
E．细胞因子的测定

三、填空题
1． 抗原与抗体发生结合反应的物质基础是________________。
2． 抗原抗体结合力的大小常用__________或__________来表示。
3． 凝集反应分为__________和___________两大类。
4． 免疫标记技术是用_______、 _________ 或__________等标记物，标记抗原或抗体，
进行抗原抗体反应的检测技术。
5． 免疫荧光技术常用的方法类型有________ 、 _________ 等。
6． 酶免疫技 术将抗原抗体反应的_________和酶催化作用的_________相结合，通过酶作
用于__ _____显色来判定结果，既可定性，又可定量，敏感度可达__________水平。
7． 酶免疫技术中常用于标记的酶有__________和_________ 等。
8． 酶免疫技术 常用的方法有__________和_________，前者测定___________，后者测定
______________。
9． __________是酶免疫测定技术中应用最为广泛的 技术，其基本方法是将____________
吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面进行 ，通过_________方法去除游
离的成分。
10. ELISA 的基本方法类型有__________、__________和_________等。

-ELISA 利用1分子亲和素可结合_______分子生物素，组成生物放大系统，从而
提高灵敏度的方法。.
是灵敏度较高的一种标记技术，其敏感度达__________水平。常用于标记的放射
性 核素有__________和__________ 。

通过尼龙毛柱时，被吸附在柱 上的是________细胞，首先被洗脱下来的是_______
细胞。
14.用抗CD4 抗体交联的磁珠可将T细胞中的___________和____________细胞分开，从
而获 得高纯度的___________细胞。
15.流式细胞术可对细胞做多参数定量测定和综合分析， 包括细胞的________、________、
_________等。
四、名词解释
1. 沉淀反应
2. 凝集反应
3. ELISA
4. 金标准
5. 免疫组化技术

五、问答题
1. 可用哪些方法定量检测血液标本中的抗原？
2. 可用哪些方法检测组织中的抗原？
3. 比较沉淀反应和凝集反应的异同。
4. T细胞增殖试验和细胞毒性试验各有哪些基本方法并简述其原理？
5. HIV感染者的诊断和病情监测可用哪些方法？为什么？
6. 如何评估免疫学检测方法？

参考答案
一、单选题
1D 2C 3C 4B 5D 6A 7C 8A 9B 10A
11D 12E 13A 14D 15C 16C 17A 18E 19 E 20C
21E
二、多选题
1. BDE 2. ABCDE 3. AC 5. ABDE 6. ABCDE 7. ACDE 8. C D E
10. A B DE 11.B D E 12. B C DE *

三、填空题
1.抗原决定基和抗体的抗原结合部位之间的结构互补性
2.亲和力 亲和力
3.直接凝集反应 间接凝集反应
4.荧光素 酶 放射性核素
5.特异性 高效性 底物 ng-pg
6.辣根过氧化物酶（HRP） 碱性磷酸酶（AP） TMB OPD ABTS 对硝基苯磷酸脂
7. 酶免疫测定 酶免疫组化 可溶性抗原或抗体 组织或细胞中的表面抗原
8. ELISA 已知的抗原或抗体 洗涤

9. 双抗体夹心法 间接法 竞争法
10.4
11. pg
125
I
131
I 液相法 固相法
12. 化学发光免疫分析
13. B T
4
+
T CD8
+
T CD4
+
T CD8
+
T
15. 大小 核型 表面分子种类

四、 名词解释
1. 沉淀反应；血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸出液等可溶性抗原与相应抗体结合
后出现沉淀物的现象称为沉淀反应。
2. 凝集反应：细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后出现凝集团块的现象，
成为凝集反应。
3. ELISA；enzyme linked immunosorbent assay , 酶 联免疫吸附试验。其基本方法是
将已知的抗原或抗体吸附在在固相载体的表面，加入含未知抗原或抗体的 标本和
酶标的抗原或抗体，使抗原抗体反应在固相表面进行，通过洗涤的方法去除液相
中的游离 成分。然后，通过酶催化底物显色来定性或定量地检测待测的抗原或抗
体。
4. 金标准：是 评估免疫学方法时，为确定真正的患者和非患者而选择的一种公认可
靠的诊断方法。假定该法检测结果为 100%可靠，即阳性为真阳性，阴性为真阴
性。用金标准与待评估的方法同时做检测，再根据检测结果 计算待测方法的特异
性和敏感性。
5. 免疫组化技术：用标记物标记抗体与组织或细胞的抗 原反应，结合形态学检查，
对抗原作定性、定量、定位检测的技术。如酶免疫组化技术、免疫金银技术、 免
疫电镜技术等等。

五、 问答题
1． 常用于定量检测血液标本中抗原的方法有：① 单向琼脂扩散试验 ：待检血液标本
中抗原含量可根据形成的沉淀环直径从标准曲线中查到。② 免疫比浊法 ：将一定量的抗体中分别加入递增量的抗原，经一定时间后形成免疫复合物。用浊度计测量
反应液体的浊度， 复合物形成越多，浊度越高。绘制标准曲线，并根据反应液体的
浊度推算样品中的抗原含量。③ ELI SA：其双抗体夹心法、竞争法等均可定量检测
血液标本中的抗原。因抗原含量与酶催化底物显色的深浅 呈正相关性，可用酶标仪
测定其OD值，然后根据标准曲线或计算公式得到待测抗原含量。④ 放射免疫测定：
⑤化学发光免疫分析： 将发光物质标记抗体进行反应，发光物质在反应剂的激发下< br>生成激发态中间体，当激发态中间体回到稳定的基态时发出光子，用自动发光分析
仪能接收发光信 号，测定光子的产量，以测定抗原的量。
2. 检测组织中抗原的方法主要是免疫组化技术 ：① 酶免疫组化技术 ② 免疫金银技术
③ 免疫电镜技术
3. 沉淀反应和凝集反应的 相同之处：都是经典的抗原抗体反应，均需在电解质的参与下，
在一定pH，一定温度下才能形成可见反 应。
不同点：① 参与抗原的物理性质不同：沉淀反应为可溶性抗原，凝集反应为颗粒性抗原。
② 可见反应产物不同：沉淀反应为出现沉淀物，凝集反应为出现凝集块。
4．1）T 细胞增殖试验检测的基本方法有：①
3
H-TdR掺入法：在PBMC 中加入PHA共

同培养，在终止培养前8-15小时加入
3
H-TdR 。
3
H-TdR 在培养过程中掺入到细胞合成的
DNA中，细胞增殖水平越高，掺入的放射性核素越多。② MTT法： 在细胞培养终止前数
小时加入MTT，作为细胞线粒体琥珀酸脱氢酶的底物参与反应，形成褐色的甲替颗 粒，
并沉积细胞内或细胞周围。甲替颗粒被随后加入的盐酸异丙醇或二甲亚砜完全溶解，用酶
标 仪测定细胞培养物的OD值。因甲替的生成量与细胞增殖水平正相关，故可用样品的
OD值反映细胞增殖 水平的高低。
2）细胞毒性试验的基本方法：①
51
Cr 释放法 ：用Na2
51
CrO
4
标记靶细胞，若待检效应细
胞能杀伤靶细胞，则
51
Cr从靶细胞中释放出来。以 计数仪测定释放出的
51
Cr放射活性，
靶细胞溶解越多，
51
Cr 释放越多，上清液的放射性活性越高。应用公式可计算出待检细胞
的杀伤活性。② 凋亡细胞检测法：靶 细胞被细胞毒性细胞杀伤后，可发生细胞凋亡，DNA
广泛断裂，产生180-200 bp 及其倍数 长度的寡核苷酸片段，可通过检测其梯状DNA区带
图谱反映细胞凋亡。还可通过TUNEL法测定凋亡 细胞数目及细胞类型，或通过流式细胞
仪直接测定凋亡细胞数，分析亚二倍体数目，指示凋亡程度。
5. HIV感染者的诊断可用以下方法： 1）病毒检测 ① 细胞培养分离HIV 用脐血或已建< br>立的T淋巴细胞，经PHA刺激后培养，3-4d后接种标本，有病毒生长的可见细胞病变，
在电 镜下看到病毒颗粒。也可用ELISA法或免疫荧光技术检测抗原。② 用分子生物学方
法检测 用PCR法检测HIV的RNA 或以标记的HIV cDNA片段为探针，通过原位杂交的
方法检测。 2）抗体的检测 ① 过筛试验 用ELISA的方法检测抗体。但因为常有假阳性
结果，故应对阳性者进行确证实验。② 确证实验 有蛋白印迹（WB）和放射免疫沉淀实
验（RIP）两种。以WB用得较为普遍。 HIV的疫情监测可通过HIV的过筛实验进行初
筛。3）CD4+T细胞计数法。
6.免疫 学检测方法的评估包括两个方面：特异性和敏感性。特异性指用该试验检查非患者
时出现阴性结果的可能 性。敏感性指用该试验检查某病患者时出现阳性结果的可能性。评
估中需要确定是真正的患者还是非患者 ，因此选择一种可靠的诊断方法即“金标准”。假设
其检测结果为100%可靠，即阳性为真阳性，阴性 为真阴性。用金标准与待评估的方法同
时做检测，根据检测结果按以下公式计算出该方法的特异性和敏感 性。特异性 = 真阴性
（真阴性+ 假阳性） 100% 敏感性 = 真阳性（真阳性+假阴性） 100%
除此之外，一种理想的免疫学方法还要求快速、简便、经济和实用。