抗体检测知识点——抗体检测方法
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抗体检测知识点——抗体检测方法
（一）中和反应
中和反应不仅测定抗体是否存在，而且测定抗体是否具有免疫保护作用，因而，
尽管这种方法复杂费时，
影响因素众多而且不稳定，在预防医学领域特别是病毒性
疾病中，仍然是不可取代的抗体检测方法。
中和试验的基本方法是，将待检物质与活的致病微生物混合，感染实验动物或
敏感的细胞，然后观察实验动物是否发病、死亡，或细胞是否发生病变。
早期中和实
验主要利用疾病的动物模型进行，目前，在病毒性疾病领域，通常
利用培养病毒的细胞进行。在结果的解
释中应当注意，细胞的中和试验通常只反应
抗体阻断病毒进入细胞的能力，这只是病毒致病过程中的一小
部分。
（二）沉淀反应
血清蛋白质、细胞裂解液或组织
浸液等可溶性抗原与相应抗体结合出现沉淀物，
这类反应称为沉淀反应。该类反应可检测到20～2mg
／ml水平的抗体。较常用的
检测方法有：
1．单向免疫扩散
将一定量已知抗原混于琼脂中制成琼脂板，在适当位置打孔后将抗体加入孔中
扩散，抗原抗
体在扩散过程中形成以抗体孔为中心的沉淀环，可用于检测血清中的
IgG、IgM、IgA和补体C3
等的含量。
2．双向免疫扩散
将抗原与抗体分别加于琼
脂凝胶中，二者自由向四周扩散，在相遇处形成沉淀
线。可用于抗体的定性、定量检测。
（三）凝集反应
细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集
团块，这一类反应称为
凝集反应，该类反应可检测到1μg／ml。
1．直接凝集
将细菌或红细胞与相应的抗体直接反应，出现细菌或红细
胞凝集现象。检测方
法有两种：一是玻片凝集试验，用于定性测抗原，多用于快速诊断；二是试管凝集<
br>试验，在试管种系列稀释待检血清，加入已知颗粒抗原（死菌或活菌，多用死菌），
进行的血清反
应，用于定量检测抗体。温箱中放24小时后取出反应管在室温放2
个小时再判断为宜，判定凝集滴度以
凝集程度为++而定。
2．间接凝集
将可溶性抗原包被
在红细胞或乳胶颗粒表明，与相应抗体反应出现颗粒凝集的
现象。如用γ球蛋白包被的乳胶颗粒，检测病
人血清中的一种抗γ球蛋白的抗体（类
风湿因子）。
（四）补体参加的反应
利用抗体与红细胞上的抗原结合，激活反应体系中的补体，导致红细胞的溶解，
用溶血现象作为指示系统帮助结果判定。常用的方法有补体结合试验和溶血空斑试
验。
（五）用标记抗原进行的抗原抗体反应
利用荧光素、酶或放射性核素等
标记物标记抗原或抗体，进行的抗原抗体反应。
灵敏度高、快速，可定性或定量，甚至定位等优点。
1．免疫荧光
将已知细菌、感染病毒的细胞等颗粒抗原等固定于载玻片，加待检血清反应后，
再
加荧光素标记的抗抗体，置荧光显微镜下观察判定，用于检测抗体。
2．酶免疫测定
是用酶标记的抗体进行的抗原抗体反应。可用目测定性，也可用酶标测定仪测
定光
密度（OD）值以反应抗体的含量，敏感度可达ng／ml甚至pg／ml。常用于
标记的酶有辣
根过氧化物酶、碱性磷酸酶等。常用的方法有酶联免疫吸附试验（EUSA）。
采用双抗体
夹心法或间接法检测特异抗体。
3．放射免疫测定法
用放射性的核素（
125
I和
131
I）标记抗原，检测抗体，
灵敏度达pg／ml。
4．免疫印迹法
将凝胶电泳与固相免疫结合，把电泳区分的蛋白质抗原转移置NC或PVDF等
膜
上。检测特异的抗体。用该法检测血清HIV抗体为诊断HIV感染的方法之一。