抗除草剂转基因玉米的快速鉴定方法
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抗除草剂转基因玉米的快速鉴定方法
作者：王莹 袁英
来源：《江苏农业科学》2014年第04期
摘要：以含不与除草甘膦结合的突变型5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因除草剂筛选标
记的转基因
玉米为材料，通过叶片喷雾和叶片离体平板培养等试验，建立快速非分子生物学抗
除草剂转基因玉米的鉴
定方法。结果表明：用5 000 mgL草甘膦叶片喷雾和用70
mgL草甘膦
叶片离体培养可快速准确地鉴定是否转入除草剂基因。
关键词：转基因玉米；抗除草剂；草甘膦；鉴定方法
中图分类号： S513.01
文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0054-03
收稿日期：2013-08-15
基金项目：吉林省财政厅育种项目。
作者简介：王莹 （1982—），女，吉林长春人，硕士，讲师，从事生物技术方向研究。
Tel：（
0431）84602461；E-mail：grammy1981@。
通信作者
：袁英，硕士，研究员，从事作物遗传转化研究。Tel：（0431）87063098；E-
mai
l：32854085@。随着转基因作物商业化生产的发展，转基因作物种植面积从1996年
的17
0万hm2增加到2012年的1.7亿hm2，增长了99倍，这是前所未有的突破，其中抗除草
剂作
物种植面积最大[1]。在植物转基因研究过程中，通常采用选择性标记基因提高筛选效
率，而除草剂基
因是较常用的筛选标记基因，而5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶（EPSPS）基因
最常用。目前，
国际上种植面积最大的抗除草剂转基因玉米是转EPSPS基因抗农达除草剂玉
米[2]。近几年，国内
对抗除草剂转基因玉米和抗除草剂筛选方法的研究也取得了很大的成功
[3-11]。在转基因研究和安
全评价等过程中对转基因植株的鉴定是必不可少的环节[12]，传统
上初步鉴定转基因的方法是利用聚
合酶链反应（PCR）鉴定目的基因DNA片段是否存在；但
是PCR方法步骤繁琐，做大量鉴定运用时
有一定的局限性。利用筛选标记基因的农艺性状，
建立快速有效的非生物鉴定方法非常必要。本研究以抗
除草剂转基因玉米为研究材料，通过叶
片喷雾、叶片离体培养方法建立抗除草剂转基因玉米快速的鉴定方
法，并探索出可以有效区分
转化和非转化植株的筛选剂浓度。本研究建立的2种检测方法既可用于转基因
植株当代的检测
筛选，又可用于转基因后代植株的大规模检测，大大减少了转基因后代培养和进一步鉴定
的工
作量。
1材料与方法
1.1材料