容志行-台式电脑一体机

紫外分光光度法测定未知样含量
(含方案、公式、标准误吸收光谱图)
1.仪器
1.1紫外可见分光光度计(T6型)；
1.2石英吸收池(1cm)：2只；
1.3比色管（50mL）10支；
1.4吸量管5mL：2支。
2.试剂
2.1苯甲酸标准溶液(0.1mgmL)；
2.2未知液：浓度约为40～60ugmL。
3.实验操作
3.1吸收曲线的绘制
3.1.1标准苯甲酸吸收曲线绘制
在一支50mL比色管中由2.1配制成浓度为0～10ugmL范围内的溶液，以水定容，
并摇匀。 于波长200～350nm范围内每间隔10nm测定一次吸光度，在最大吸收波长附近
间隔5 nm测定一次测定吸光度，再次根据最大吸收波长，附近间隔1 nm测定一次吸光
度，绘制吸收曲线，从曲线上确定苯甲酸的最大吸收波长（作为定量测定波长）。
附图：苯甲酸的吸收曲线。
3.1.2标准水杨酸吸收曲线绘制
在一支50mL比 色管中由2.1配制成浓度为0～10ugmL范围内的溶液，以水定容，
并摇匀。于波长200～35 0nm范围内每间隔10nm测定一次吸光度，在最大吸收波长附近
间隔5 nm测定一次吸光度，再次根据最大吸收波长附近，间隔1 nm测定一次吸光度，
绘制吸收曲线，从曲线上确定水杨酸的最大吸收波长（作为定量测定波长）。
附图：水杨酸吸收曲线。
3.1.3未知液吸收曲线的绘制
准确吸取含苯甲酸的 未知液若干体积（5mL）于一支50mL比色管中，以水定容并
摇匀。以蒸馏水为参比，于波长200 ～350nm范围内每间隔10nm测定一次吸光度，在最
大吸收波长附近间隔5 nm测定一次吸光度，再次根据最大吸收波长，附近间隔1 nm测
定一次吸光度，绘制吸收曲线。（观 察3.1.1和3.1.2各自所得吸收曲线有什么相同之处？
这说明了什么问题？对于一个未知样品如 何利用分光光度法进行定性？）
附图：未知液的吸收曲线。
3.2吸收池配套性检查 石英吸收池装蒸馏水，于定量测定波长处，以一个吸收池为参比，测定并记录另一
吸收池的吸光度（ 其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，否则更换）作为校正值。
3.3校准曲线的绘制及未知样含量的测定
准确移取与未知样相同的物质的标准溶液若干体积 于50mL比色管中，以水定容，
制成一系列相同体积不同浓度的标准溶液（0～10ugmL），在最 大吸收波长处，以水为
参比，测定各自吸光度。由实验数据计算回归方程及相关系数，以浓度（ρ ug·mL
-1
） 为
横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制校准曲线。
在 相同条件下，测定样品稀释液（配制方法同3.1.2）的吸光度，代入回归方程计算
出样品稀释液的浓 度。试样平行测定三份。
4.结果计算
根据未知液的稀释倍数，求出未知溶液中水杨酸的含量。

【相关计算及公式】
1.校准曲线
由试验点经最小二乘法对试验数 据进行回归计算，得出一元一次线性回归方程，并
计算出该方程的相关系数。然后在坐标纸上画出该回归 方程的直线。回归方程为：
y

a

bx
其中：
b

L
xy
L
xx

a

y

bx
L
xx

L
xy< br>
L
yy

2.相关系数

(
x
i

(
x
i

(
y
i


x
)
2

x

y
2
(
x
)
n
;
2

x
)(
y< br>i

y
)

y
)
2

2

xy


x

y
(

y
)
n
;
2

n
;


L
xy
L
xx
L
yy
3.相对标准偏差
：按照未知 稀释液的
A
校正
计算
相对标准偏差
RSD

RSD

S
100%
x

(x
i< br>x)
2
100%

n1
x
4.未知稀释液含量 ：稀释后未知溶液中待测组分的浓度应由回归方程计算而得。
y
1

aA

a

1


bb
y
2

aA
2

a


x


22
bb
y< br>3

aA
3

a


x
 

33
bb
x
1
x
2

x
3


则：


x

3

1

x
1

5.未知溶液中待测组分的含量：根据未知液的稀释倍数，可求出未知溶液中待测组分的含量。

维生素C吸收曲线(10ugmL)
1.4
1.2< br>1
吸
光
度
0.8
0.6
0.4
0.2
0
220345350
波长

附图1 维生素C吸收曲线