PI 染色
绝世美人儿
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2021年01月22日 15:40
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PI
染色
荧光染料
PI
（碘化丙啶）是一种可对
DNA
染色的细胞核染色试剂，常用于细胞
凋亡检测，英文全称是
Propidiu m Iodide
。它是一种溴化乙啶的类似物，在嵌
入双链
DNA
后释放红 色荧光。尽管
PI
不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细
胞膜而对核染色。
PI
经常被用来与
Calcein-AM
或者
FDA
等荧光探针一起 使用，
能同时对活细胞和死细胞染色。
PI- DNA
复合物的激发和发射波长分别为
535 nm
和
615 nm
。
PI
可以用来进行活细胞、死细胞的双重染色
钙黄绿素
-AM(Calcein-AM)
和碘化丙啶
(PI)
溶液 ，它们分别可对活细胞和死细胞
染色。
Calcein
-AM
的乙酸甲基酯 亲脂性很高，
使其可透过细胞膜。
尽管
Calcein
-AM
本身并不是荧光分子，但通过活细胞内的酯酶作用，
Calcein
-AM
能脱去
AM
基，产生的
Calcein
能发出强绿色荧光（激 发：
490 nm
，发射：
515 nm
）
。因此
Calcein -AM
仅对活细胞染色。另一方面，作为核染 色染料的
PI
不能穿过活细
胞的细胞膜。
它穿过死细胞膜的无序区域而到达细 胞核，
并嵌入细胞的
DNA
双螺
旋从而产生红色荧光（激发：
535 nm
，发射：
617 nm
）
。由于
Calcein
和
PI- DNA
都可被
490 nm
激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用
545 nm
激发，仅可观察到死细胞。
由于不同细胞系的最佳染色条件不同，
我们建议个别
确定PI
和
Calcein -AM
的合适浓度。
I
．试剂
Calcein-AM
PI
II
．用荧光显微镜观察细胞形态
以
HeLa
细胞染色为例
,
请注意不同的细胞种类、不同浓度有不同的观察条件。
根据细胞条件 ，摸索不同条件下的细胞贴壁情况和试剂浓度的配制等最佳条件。
１．染色溶液的配制
1
）用
1 ml
无水
DMSO
溶解
1 mg Calcein- AM
，制备成
1 mmol/l
的
Calcein- AM
储
备液，
-20
℃下密闭冷冻保存。
2
）用
1 ml ddH
2
O
溶解
1 mg PI
，制备成
1.5 mmol/l
的
PI
储备液（
1 mg PI/1 ml
H
2
O
）
，
-20
℃下密闭冷冻保存。
3
）将
Calcein- AM
储备液和
PI
储备液放置于室温。
4
）加
10
μ
l Calcein- AM
储备液和
15
μ
l PI
储备液至
5 ml PBS
中配制成染色
溶液。
Calcein- AM
的终浓度为
2
μ
mol
／
l
，
PI
的终浓度为
4
μ
mol
／
l
。
2
．细胞染色
1
）
染色
HeLa
细胞等贴壁细胞时
,
先用
Trypsin- EDTA
等消化细胞，
制备成细胞悬
液。
2
）将细胞悬液离心
3
分钟
(1,000 rpm)
。
3
）去除上清液，加入
PBS
缓冲液，细胞 数量调整至
10
5
–
10
6
个／
ml
。再用移液
器充分混匀。