HE染色
玛丽莲梦兔
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2021年01月22日 15:47
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-关于母亲的手抄报
HE
染色注意事项：
1.
染色时
PH
值的调节是很重要的，有时组织块在多聚甲醛中固定时间过长往往使组织酸化
而影响细胞核的着色，因此 切片入水后，转入饱和碳酸锂水溶液中处理
10
－
30
分钟，这样
可 使细胞核着色较好。
2.
用伊红染色切片时，
往往在经脱水的低浓度酒精时 极易脱色，
特别是对于细胞密集的组织
更明显，这时可在脱水至
95
％酒精< br>1
后，再以
95
％配制的
1
％伊红液中复染
3
－
5
分钟，然
后脱水透明，可以获得满意的效果。
3.
苏木精染色后，分色是至关重要的，应该在显微镜下进行。一般以细胞核染色比较清晰，
细胞质等基本无 色为宜。
如发现过染，可以延长分色时间，若染色太浅，则应重新进行染色
后再分色，总之必需 分色至细胞核清晰而背景基本无色才能往下进行。
4.
切片经酒精脱水后，
如在转入二甲苯时有混浊现象产生或呈白色不透明状态，
此为脱水不
彻底，应立即将切片退回无 水酒精重新脱水，如再不透明时则应更换无水酒精。
1
、切片在脱蜡后出现大片白色的斑点（图
1
）
原因：由于烤（烘）片温度太低，玻片在脱蜡前没有充分烤（烘）干；切片在二甲苯停
留时间不足，或二甲苯使用过久，造成脱蜡不尽。
对策：如果玻片是 由于没有烤（烘），先用无水乙醇处理去除玻片上的水分，然后重新
用二甲苯脱去石蜡。
如果烤
（烘）
干不足的现象比较严重，
可能导致切片脱落，
则无法补救。
如 果白色斑点是由于切片在二甲苯停留时间不足造成，
或使用的二甲苯过久，
切片则需退回
到二甲苯停留时间相对长些，或更换二甲苯，脱色、漂白、重新染色。
2
、细胞核染色苍白、暗淡，即苏木精染色太淡
（图
2
）
原因：
此类问题可能有
3
个影响因素，
切片在 苏木精染色液停留时间太短；
苏木精染色
液过度氧化，失去染色能力，不能再继续使用；分化步 骤处理时间过长。如果是骨组织细胞
核暗淡，则多数是由于脱钙过度造成。
对策：切片重新染色。如果组织在酸性固定液如
Zenk2er
、
Bouin
及非中性缓冲甲醛液
固定时间过长，
细胞核染色能力将减弱，
须增 加其在苏木精染色液的时间，
或用一些方法增
加组织的嗜碱性，
以改善细胞核的着色。
例如：
建议上述组织切片最好使用
Weigert
铁苏木
精染色液； 如果组织是用
Zenker
液固定的，可将切片脱蜡后放在
5%
碳酸氢钠溶液
3
～
4h,
流水冲洗
5min
后染色；如果组织是用
Bouin
液固定的，可将切片脱蜡后放在
5%
碳酸锂
1h,
流水 冲洗
10min
后染色。
3
、细胞核过染， 即苏木精染色太深，甚至苏木精染液的分布占据了细胞质的位置
（图
3
）
原因：
此类问题可能有
3
个影响因素，即切片在苏木精 染色液停留过长、切片太厚、分
化步骤时间太短。
对策：如果切片不是因为太厚
（用显微镜仔细上下调节微调，
只有一二层细胞核层次）
，
脱色、
漂白、重新染色，对于染色和分化时间做些适当的调整。
如果确定是由于切片太 厚导
致的细胞核过染，则需要重新切片。
4
、细胞核呈红、棕色改变
（图
4
）
原因：主要有苏木精染色液过度氧化和切片在苏木精染液染色后返蓝不足。
对策：首先，每次染色之前检查苏木精染色液的染色能力，发现氧化过度应及时更 换。
其次，可用流水、
温水或弱碱性溶液如稀氨水、
0.2%
碳酸氢钠等，在 苏木精染色后，给切片
以足够的蓝化时间
。
图
3
皮肤切片，细胞核过染，核膜、核仁等不清晰，细胞质（尤其是皮肤上皮细胞）含
有大量的 细胞核染色液苏木精，导致细胞核与细胞质比例失调
图
4切片细胞核棕色，表明苏木精没有充分蓝化，或苏木精过度氧化失去染色能力
5
、伊红着色淡
（图
5
）
原因：伊红染液的
pH
值可能大于
5;
也可能是蓝化液残留过多；
切 片太薄
；或切片经伊
红染色后在乙醇脱水时间过长。
对策：
检查伊红染液的
pH
值，
如果必要的话，
用乙酸将其调节在< br>416
～
510
之间，从而
使伊红染色色彩艳丽。
确保每次蓝 化步骤完成后，
使用的弱碱性溶液被充分洗去，
玻片上没
有残留的弱碱性溶液。
检查切片的厚度。
脱水时不要让切片在低浓度乙醇停留时间过长
，
因
为含水 多的低浓度乙醇会将伊红的颜色分化掉。
6
、细胞质过染、分色不足
（图
6
）
原因：
伊红染色液浓度太高，特别是焰红燃料、四溴四氯荧光素钠的存在；切片在伊红
染色时间过长；
切片在伊红染色后经乙醇脱水步骤时过的太快，
而使乙醇分化伊红的作用不能产生。
对策：
适当稀释伊红染色液，减少伊红染色时间 ，或者使切片在乙醇脱水等步骤时，停
留时间相对均匀。同样，也要检查切片的厚度是否合适。
图
5
切片中央区域伊红染色不均匀，可能为弱碱性溶液残留导致伊红拒染所致
图
6
伊红深染导致细胞核与细胞质没有层次，缺乏对比（箭头）
7
、切片中出现蓝黑色沉淀物
（图
7
）
原因：苏木精染色液中的金属膜，黏附在玻片上。
对策：每天染色前仔细过滤苏木精染色液，或建议使用半氧化苏木精染色液，如
Gill
苏木精染色液，可以避免过多的金属膜产生。
8
、显微镜下见切片内有大量水珠
（图
8
）
原因：
切片经梯度乙醇处理后没有完全脱水，
导致二甲苯透明中性树胶封固 后残留大量
水分。
对策：
移去盖玻片，
用二 甲苯溶解封固剂如中性树胶。
将切片置入新鲜的无水乙醇换几
道。
待切片重新脱水完全 后，
用新二甲苯透明，
中性树胶封固。
所有用于脱水和透明的液体，
在使用一 定时间以后，应即时更换
。
9
、光镜下切片某些区域难以聚焦
（图
9
）
原因：盖玻片上可能有封固切片的封固剂。
对策： 移去盖玻片，重新用干净的盖玻片封片。检查切片封片方法，是人工手工封法，
还是机器自动封法，如有 问题及时调整。
图
7
使用没有过滤的Harris
苏木精染液致切片中可见苏木精结晶
图
8
玻片内含有残留水分，在显微镜下呈现大量水珠或云雾状改变